雜交瘤細胞無血清培養基

簡要描述:
雜交瘤細胞無血清培養基是化學成分明確、使用中不需添加血清的培養基,用于雜交瘤細胞的培養,以獲取特定的單克隆抗體。使用雜交瘤細胞無血清培養基可簡化后期蛋白純化的環節,獲得高表達量的單克隆抗體。

產品描述

雜交瘤細胞無血清培養基

【雜交瘤細胞無血清培養基   用途與描述】
1、雜交瘤細胞無血清培養基可用于小鼠雜交瘤細胞的培養。一般不需馴化,可直接轉入雜交瘤細胞無血清培養基中。
2、雜交瘤細胞無血清培養基也可用于大鼠及倉鼠雜交瘤細胞培養,但一般需要馴化,方可適應無血清的培養環境。
雜交瘤細胞無血清培養基.jpg3、雜交瘤細胞無血清培養基中蛋白含量低,有利于表達抗體的純化。
4、雜交瘤細胞無血清培養基內毒素低于0.25EU/mL,減少了腹水條件下困難的內毒素去除操作。
5、三種適合不同生產用量的配套工藝(搖瓶、透氣袋、生物反應器)

雜交瘤細胞是將免疫的小鼠脾淋巴細胞(B細胞)與小鼠骨髓瘤細胞融合在一起,該細胞既具備細胞能夠產生特異性抗體的特性,又具備腫瘤細胞能夠無限傳代(永生性)的特點。因此通過雜交瘤細胞的不斷傳代,就會得到所需種類的單克隆抗體。

【雜交瘤細胞無血清培養基   規格與保存】

產品貨號產品名稱產品規格保存條件有限期限
NC0301雜交瘤細胞無血清培養基1000mL/瓶2-8℃保存12個月
NC0301.S雜交瘤培養基抗增劑100mL/瓶2-8℃保存12個月

 在雜交瘤細胞株培養的后期添加雜交瘤培養基抗增劑,可以刺激單克隆抗體表達。

【雜交瘤細胞無血清培養基   主要成分】
雜交瘤細胞無血清培養基主要成分:氨基酸,無機鹽,人白蛋白,轉鐵蛋白,胰島素,微量元素等。

【雜交瘤細胞無血清培養基   實驗數據】

一、雜交瘤細胞不同培養方式細胞數量與抗體產量對照表(1號細胞株)

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培養條件最高細胞密度(1號株)最高抗體濃度(1號株)
靜態培養1.470x106/ml322.5mg/L
搖瓶培養2.185x106/ml510.0mg/L

靜態培養條件:T25培養瓶,5mL培養基。細胞接種密度7.0x104/mL。連續7天不換液培養。
搖瓶培養條件:125mL搖瓶,30mL培養基,轉速90rpm。細胞接種密度7.0x104/mL。連續7天不換液培養。

二、雜交瘤細胞不同培養方式細胞數量與抗體產量對照表(2號細胞株)

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培養條件最高細胞密度(2號株)最高抗體濃度(2號株)
靜態培養1.350x106/ml384mg/L
搖瓶培養1.588x106/ml521mg/L

靜態培養條件:T25培養瓶,5mL培養基。細胞接種密度4.0x104/mL。連續7天不換液培養。
搖瓶培養條件:125mL搖瓶,30mL培養基,轉速90rpm。細胞接種密度4.0x104/mL。連續7天不換液培養。

三、三種適合不同生產用量的配套工藝(搖瓶、透氣袋、生物反應器)的培養數據

1、培養瓶靜態培養數據
1號細胞株
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培養瓶靜態培養條件:T25培養瓶,5mL培養基。細胞接種密度3.5x105/mL。連續7天不換液培養。

培養瓶靜態細胞峰值:1.282x106/mL
培養瓶靜態抗體峰值:329.5mg/L(檢測方法:小鼠IgG  Elisa檢測)

2號細胞株
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培養瓶靜態培養條件:T25培養瓶,5mL培養基。細胞接種密度2.6x105/mL。連續7天不換液培養。

培養瓶靜態細胞峰值:1.335x106/mL
培養瓶靜態抗體峰值:390mg/L(檢測方法:小鼠IgG  Elisa檢測)

2、搖瓶培養數據

1號細胞株
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搖瓶培養條件:125mL搖瓶,30mL培養基,轉速90rpm。細胞接種密度7x104/mL。連續7天不換液培養。

搖瓶細胞峰值:2.185x106/mL
搖瓶抗體峰值:510mg/L(檢測方法:小鼠IgG  Elisa檢測)

2號細胞株
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搖瓶培養條件:125mL搖瓶,30mL培養基,轉速90rpm。細胞接種密度4x104/mL。連續7天不換液培養。

搖瓶細胞峰值:1.588x106/mL
搖瓶抗體峰值:521mg/L(檢測方法:小鼠IgG  Elisa檢測)

3、2L培養袋培養數據(靜態培養)
1號細胞株
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培養袋靜態培養條件:2L培養袋,1L培養基。接種密度3.4x105/mL。連續9天根據密度補液培養。

培養袋細胞峰值:2.542x106/mL
培養袋抗體峰值:480.3mg/L(檢測方法:小鼠IgG  Elisa檢測)

2號細胞株
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培養袋靜態培養條件:2L培養袋,1L培養基。接種密度2.0x105/mL。連續9天根據密度補液培養。

培養袋細胞峰值:2.170x106/mL
培養袋抗體峰值:522.5mg/L(檢測方法:小鼠IgG  Elisa檢測)


四、與現有國外品牌的部分對照數據

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細胞密度方面:Yocon培養基最高細胞密度為1.282x106/mL,*****培養基最高細胞密度為1.370x106/mL。最高細胞密度確實差異不大。
細胞倍增時間方面:Yocon培養基第2天即達到了細胞密度峰值,*****培養基第3天達到細胞密度峰值。細胞倍增時間差異顯著。

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抗體表達方面:
1號細胞株。Yocon小鼠IgG抗體表達量峰值為329.5mg/L,相比*****的240.0mg/L。多出37%。差異明顯。     

【雜交瘤細胞無血清培養基   使用前特別提示】 

1. 雜交瘤細胞無血清培養基的使用方法與血清培養基及血清替代物培養基相比,確有差別。

敬請用戶仔細查看雜交瘤細胞無血清培養基產品使用說明書后操作,請勿僅以既往經驗使用本產品。
與血清培養基相比,本產品在培養某些雜交瘤細胞時,需提前進行馴化。

1) 對于采用血清及血清替代物培養的雜交瘤細胞,在初次使用Yocon 雜交瘤細胞無血清培養基時,為防止培養環境的劇烈變化對
細胞造成的損傷,需要對細胞進行馴化操作。
首次更換為Yocon 雜交瘤細胞無血清培養基時,需要在其中添加原培養方法中等量的血清或者替代物。在此后的兩次細胞傳代中,
依次減半血清或者替代物的濃度。第三次傳代,直接離心取上清,更換為Yocon 雜交瘤細胞無血清培養基,完成馴化過程。
2) 對于采用無血清培養基培養的雜交瘤細胞,可以直接更換為本產品進行換液和傳代操作,無需經歷馴化過程。

2. 使用培養基靜態培養和動態培養的不同之處

靜態培養:如客戶靜態培養,可直接使用本培養基,無需做任何處理
動態培養:如客戶動態培養,需額外添加0.1%PLURONIC F-68,防止在攪拌培養中,剪切力對細胞的損傷。如未添加防剪切力
保護劑,細胞生長不佳,甚至死亡。

【雜交瘤細胞無血清培養基   使用方法】 

見《雜交瘤細胞無血清培養基產品使用說明書》(請聯系客服)

【提供生物反應器級別的雜交瘤細胞大規模培養技術方案】

友康生物擁有先進的無血清培養基全套開發裝備,包括進口生物反應器、高效液相色譜儀、生化分析儀、流式細胞儀等。
借助這些裝備,我們可以迅速、有效的為用戶定制基于客戶需求的的雜交瘤無血清培養基。綜合成本顯著低于現有的DMEM+10%血清的形式。
我們已經為全國的多家生產企業提供了技術服務。

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我們可為您構建無血清平臺提供如下技術支持:
1、現成可用的生物反應器培養工藝,包括反應器整體運行參數、溶氧、氣體組合、補料策略等。
2、提供生物反應器條件下1L、5L、10L、50L的大規模培養工藝。并可便利的升級到50L及500L。
3、為大規模生產企業提供基于細胞株的個性化雜交瘤細胞培養基的定制,包括基礎培養基及補料培養基。

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 【雜交瘤細胞無血清培養基   產品質量】

友康生物是否值得信賴?

友康生物專注于無血清培養基產品的研發與生產。

2014年,推出了免疫細胞無血清培養基
2015年,推出了MDCK細胞無血清培養基
2016年,推出了雜交瘤細胞無血清培養基、Hela細胞無血清培養基
2017年,推出了MSC無血清培養基、293細胞無血清培養基、CHO細胞無血清培養基

產品質量如何?

產品無菌率
絕非夸大,自2014年將培養基灌裝由手工灌裝改為全自動液體培養基生產線灌裝以來,從未發生過1瓶培養基污染的情況。

內毒素低于0.25EU/mL
自引進專門的內毒素去除設備后,產品內毒素均低于0.25EU/mL。

產品品質的硬件保障

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1000L及250L配液罐
全自動液體培養基灌裝線.jpg
培養基全自動灌裝線

客戶問答

1、雜交瘤細胞初次培養及復蘇效果不佳,如何解決此問題?

      答:請先按照本公司馴化適應程序進行細胞馴化,馴化后的細胞即可完全適應本公司的無血雜交瘤細胞系種類繁多,并不是所有的細胞系都能直接適應無血清培養基,如無法適應培養基。
復蘇問題:如凍存的雜交瘤細胞活率較低,復蘇時可加5%胎牛血清于無血清培養基中,可修復受損細胞的狀態,細胞復蘇時接種密度要求大于1x105cells/mL可保證更好的復蘇率。

2、雜交瘤細胞傳代最佳的接種密度是多少?

      答:經過我們反復測試,最佳接種密度為1-2x105cells/mL,3-4天可達到峰值,細胞生長周期短,適合工業客戶。

3、什么時候添加抗增劑?

      答:達到最大細胞濃度時,添加抗增劑,提高抗體產量

4、我的細胞一直是用含血清培養基培養的,可以直接轉到無血清培養基中嗎?

      答:細胞可以直接適應無血清培養基,無需馴化,四天可達到倍增峰值。

5、你們的雜交瘤細胞無血清培養基的質控標準有哪些?

      答: 質控標準如下

PH值:7.0-7.4

滲透壓:270-350 mOsm/Kg

無菌:霉菌、細菌不得檢出

內毒素:小于5EU/mL

裝量:1000ml/瓶

外觀:橘紅色澄清液體

保存溫度:2-8℃,避光保存

6、無血清培養雜交瘤細胞最大生長支持密度多少?怎么我養的幾種雜交瘤細胞差距很大?

     答:由于雜交瘤細胞系種類繁多,不同的細胞系最大生長密度也不一致,目前我們測試的細胞株最高的密度可到3x106 cells/mL,最低的密度在1.6x106cells/mL。這取決于所培養的細胞株本身的特性。

7、貴公司無血清培養雜交瘤細胞抗體表達一般在什么水平?

     答:目前我公司測試的兩株細胞系,IgG抗體最高表達量在480-520ug/mL,國外培養基IgG抗體最高表達水平在400-500ug/mL,我公司的產品在抗體表達量上有明顯的優勢。

8、我培養的雜交瘤細胞抗體表達量總是很低,有辦法進一步提高抗體表達量嗎?
     答:我公司在雜交瘤細胞培養方面,引入了全新的培養袋法,igG表達量可從 300-400ug/mL提高到480-520ug/mL,我們可提供相關技術支持。

使用說明

使用說明下載

背景知識

1.雜交瘤細胞的由來

雜交瘤細胞是一種應用非常廣泛的工程細胞。用于單克隆抗體的生產。
美國科學家克勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)在1975年證明將免疫的小鼠脾淋巴細胞(B細胞)與小鼠骨髓瘤細胞融合在一起,會得雜交瘤細胞,該細胞既具備B細胞能夠產生抗體的特性,又具備腫瘤細胞能夠無限傳代(永生性)的特點。因此通過雜交瘤細胞
的不斷傳代,就會得到所需種類的單克隆抗體。這一發現開啟了單克隆抗體應用于臨床體外精確診斷及臨床體內治療的偉大領域。自此所出現的用于腫瘤治療、免疫系統疾病治療的基因重組抗體,皆由此發展而來。這兩位科學家因此發現獲得了1984年諾貝爾生理學及醫學獎。

2.生產單克隆抗體細胞所需的培養基

生產應用所需的天然單克隆抗體,主要是通過動物細胞的大規模培養獲得。

培養細胞使用的培養基主要有兩種:
(1)血清培養基(1640培養基+10%-20%血清)。
這種形式為目前國內常見的應用方式。由于血清中蛋白含量很高(超過>20%以上),且蛋白種類很多(幾十種),所以給后期的單克隆抗體純化帶來了更多的操作工藝環節與更高的純化費用。由于血清為天然產品,品質控制受限,所以血清批間差大的問題眾所周知,卻無法排除。給生產企業帶來了很大的困擾。

(2)應用雜交瘤細胞無血清培養基。
雜交瘤細胞無血清培養基,是專門為雜交瘤細胞生長所定制的化學成分明確、使用中不需添加血清的培養基。該培養基用白蛋白第五組分 (BSA)  、轉鐵蛋白等蛋白組分,替代了血清,達到了培養雜交瘤細胞的目的。由于培養基的化學成分明確,沒有添加血清,因此,對單抗生產企業而言,簡化了后期蛋白純化的環節,降低了后期昂貴的蛋白純化耗材的消耗。是目前國外生產單抗的主要方式。


友康生物的雜交瘤細胞無血清培養基產品,于2016年7月15日正式上市銷售。友康生物的雜交瘤無血清培養基無血清、化學成分限定、低蛋白,已有的雜交瘤細胞可直接轉入該培養基培養,無需細胞馴化操作。

雜交瘤無血清培養基,用于雜交瘤及小鼠骨髓瘤的培養。正如名字所展示的那樣,這是一種無血清細胞培養基,在使用時不需添加血清。用于替代原有的1640培養基+血清的形式。
雜交瘤細胞是一種應用非常廣泛的工程細胞。用于單克隆抗體的生產。美國科學家克勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)在1975年證明將免疫的小鼠脾淋巴細胞(B細胞)與小鼠骨髓瘤細胞融合在一起,會得雜交瘤細胞,該細胞既具備B細胞能夠產生抗體的特性,又具備腫瘤細胞能夠無限傳代(永生性)的特點。因此通過雜交瘤細胞的不斷傳代,就會得到所需種類的單克隆抗體。這一發現開啟了單克隆抗體應用于臨床體外精確診斷及臨床體內治療的偉大領域。自此所出現的用于腫瘤治療、免疫系統疾病治療的基因重組抗體,皆由此發展而來。所以,這兩位科學家因此發現獲得了1984年諾貝爾生理學及醫學獎。
目前國內大規模應用雜交瘤培養基生產單克隆抗體,大部分用戶是采用1640培養基+血清的形式,血清用量從10%-20%不等。由于血清中蛋白含量很高(超過20%以上),且蛋白種類很多(幾十種),所以給后期的單克隆抗體純化帶來了更多的操作工藝環節以及更少的單克隆抗體的得率。另外,由于血清為天然產品,品質不可控,所以血清批間差大的問題眾所周知,無法排除。給生產企業帶來了很大的困擾。無血清培養基,由于培養基中沒有血清,因此沒有這些問題。但由于其高昂的價格,一直未能在生產領域得到廣泛的應用。
友康生物是一家專注于無血清培養基領域的研發生產企業,為用戶提供用得起的無血清培養基是友康生物的宗旨。友康生物迄今已經推出了免疫細胞無血清培養基(NK、T)、間充質干細胞無血清培養基(MSC)、MDCK細胞無血清培養基(可同時培養MDCK、HELA、MK2、Vero細胞)、無血清細胞凍存液、無動物源胰酶等產品。友康生物擁有國內為數不多的全自動液體培養基生產線,批次產能1000L,全機械手操作,內毒素水平0.03-0.06EU/ml。達到了國際無血清培養基的質量水準。已經上市的無血清培養基產品由于其比肩國外產品的性能與質量,迅速占據了中國的大片的市場份額。
無血清培養基是大勢所趨。友康生物有信心在中國市場加速這一趨勢轉變為現實。

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